
本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數規格:
產品名稱:犬源性成分(Canine)PCR檢測試劑盒
產品規格:50T
產品貨號:FS-P64094
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據機型決定,具體見使用方法)。
產品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數量相應增加2或3倍。
11. 產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
鈉離子膜通道轉運功能檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
PU-H71 PUH71 873436-91-0 質量規格:>98%,HSP90抑制劑
體外非細胞系統細胞色素P450亞酶(CYP-ECOD)總活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
人血液載脂蛋白A1(APOLIPOPROTEIN A1)比濁法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
百里香酚蘭鈉 Thymol blue sodium salt 62625-21-2 質量規格:AR
富馬酸酮替芬(標準品) Ketotifen fumarate 34580-14-8 質量規格:HPLC>98%,標準品
曙紅Y,醇溶劑紅 43 Eosin Y ,alcohol solution 15086-94-9 質量規格:AR
布洛芬(標準品) Ibuprofen 15687-27-1 質量規格:HPLC>98%,標準品
哈西奈德(標準品) Halcinonide 3093-35-4 質量規格:含量測定
1,4-雙(4-氨苯氧基)苯(>98.0%(GC)(T)) 1,4-Bis(4-aminophenoxy)benzene 581437 質量規格:>98.0%(GC)(T)
N,N'-二琥珀酰亞胺基碳酸酯(>98%,EP) N,N'-Disuccinimidyl carbonate (DSC) 74124-79-1 質量規格:>98%,EP
糖脂;植物鞘胺醇 ribophytosphingosine hydrochloride 554-62-1 質量規格:≥98%,進口原裝
組織游離氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
氯唑沙宗(標準品) Chlorzoxazone 95-25-0 質量規格:HPLC>98%,標準品
通用型魚濾過性毒敗血癥(Viral Haemorrhagic Septicaemia)基因檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
細胞/組織多聚賴氨酸載玻片制備試劑盒 進口/國產 規格:5次(50至100片)
犬源性成分(Canine)PCR檢測試劑盒phospho-MCK10/CD167a/DDR1(Tyr513) 磷酸化神經上皮酪氨酸激酶抗體(激酶10) 規格: 0.1mlGoat Anti-Bovine IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標記的羊抗牛IgG 規格: 0.1ml
phospho-FADD(Ser194) 磷酸化Fas死亡結構域相關蛋白抗體 規格: 0.1mlMouse Anti-human IgM/AP 堿性磷酸酶(AP)標記的小鼠抗人IgM 規格: 0.1ml
URG4 (C terminal) 上調基因4抗體(C端) 規格: 0.2mlPhospho-Rb (Ser608) 磷酸化視網膜母細胞瘤相關蛋白1抗體 規格: 0.1ml
NHE1/APNH1 鈉通道蛋白抗體 規格: 0.2mlTMEM74 跨膜蛋白74抗體 規格: 0.2ml
Renin 素/管緊張素形成酶Ren1抗體 規格: 0.1mlITPR3 5-三磷酸肌醇受體3抗體 規格: 0.2ml
FAM82A1/RMD2 微管動力調節蛋白2抗體 規格: 0.2mlphospho-CDKN1A/P21 (Thr57) 磷酸化p21蛋白抗體 規格: 0.1ml
NALP4 /睪抗原58抗體 規格: 0.2mlphospho-C-Myc(Thr373) 磷酸化致基因C-Myc抗體 規格: 0.1ml
5HTR3B/5HT3B receptor 5-羥色胺受體3B抗體 0.1mlPhospho-TIF1 beta(Ser824) 磷酸化轉錄中介因子Tif1β抗體 規格: 0.1ml
phospho-p23 (Ser113) 磷酸化端粒酶結合蛋白P23抗體 規格: 0.1mlGoat anti-Gpig IgG whole serum 羊抗豚鼠IgG抗清 規格: 1ml
CST8/Cystatin 8 胱抑素8/半胱氨酸蛋白酶抑制劑8抗體 規格: 0.2mlMTP18 線粒體蛋白18抗體 規格: 0.2ml
Profilin 2 前纖維蛋白2抗體 規格: 0.1mlXAB2/SYF1 XAB2蛋白抗體 規格: 0.2ml
ARSH 芳香基硫酸酯酶H抗體 規格: 0.2mlPhospho-CHK2 (ser33) 磷酸化細胞周期檢測點激酶2抗體 規格: 0.1ml
MyoGEF 肌球蛋白相互作用G蛋白交換因子抗體 規格: 0.2mlRabbit Anti-Avidin/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗親和素 規格: 0.1ml
APLP1 淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1抗體 規格: 0.2mlMouse Anti-human IgM/FITC FITC標記的小鼠抗人IgM 規格: 0.1ml
Menin/Men1 Menin抑蛋白抗體 規格: 0.2mlSDHA 琥珀酸脫酶復合體亞基A抗體 規格: 0.2ml
Rabbit Anti-Guinea pig IgM/Bio 生物素標記的兔抗豚鼠IgM 規格: 0.3mlPRSS3 腦胰蛋白酶3抗體 規格: 0.2ml