商品屬性：
產品名稱
英文名稱
SW1463
產品貨號
AXB6730
培養條件
Leibovitz's L-15
Medium+10% fetal bovine serum37 ℃,
5% CO2
生長特性
貼壁生長
細胞形態
上皮細胞樣
產品種屬
人
凍存條件
90% FBS + 10% DMSO
組織來源
直腸
用途
僅供科研研究實驗
商品詳情：
種屬來源；人
組織來源；直腸
性別年齡；66歲，白人女性
生長特性；貼壁生長
細胞形態；上皮細胞樣
細胞規格；1 X 106cells/T25或1 mL凍存管
培養條件；Leibovitz's L-15 Medium+10%
fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2
凍存條件；90% FBS + 10% DMSO
傳代方法；1:3傳代,
2-3天傳1代
細胞培養操作：
1) 復蘇細胞：以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中培養，補加培養基至6ml。24-48h后換液。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養液后吹勻。
d、將細胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中。
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞傳代培養操作步驟：
（1）當顯微鏡下細胞形態和生長密度達到90%時，進行傳代。
（2）吸棄培養液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養瓶放入37℃培養箱進行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細胞有無超過80%的量，發生收縮變圓、細胞間隙變大。輕輕拍打培養瓶使剩余細胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細胞懸液吸至離心管內，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養液重懸細胞，吹打細胞使其均勻分散。
（7）吸棄細胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養瓶中，補充培養液并搖勻，放置37℃的CO2培養箱進行培養。
（8）根據細胞生長狀態確定換液或傳代時間。
（9）細胞凍存。
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