實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
大鼠破骨細胞分離自骨組織和骨髓；破骨細胞是骨組織中的多核巨細胞，位于骨組織表面的淺凹處。目前一般認為破骨細胞是分離自骨骼外的造血系統，其前體可能屬于造血干細胞的前單核細胞。破骨細胞的主要功能是維持骨吸收和骨形成的相對平衡，若失去這種平衡則發生病理性變化。因此多數學者從破骨細胞著手研究破骨細胞的結構、功能探討骨吸收，形成相互平衡的機制。但破骨細胞是一種終末分化細胞，屬于不增殖細胞群，不能增殖和傳代，只能進行原代培養且存活時間較短。
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組織來源 |
產品規格 |
貨號 |
用途 |
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骨髓 |
5×105cells/T25細胞培養瓶 |
A01X1654 |
僅供科研研究實驗 |
培養信息：
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 多核、巨細胞
傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的大鼠破骨細胞采用機械分離法/密度梯度離心法和骨髓單核細胞誘導法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的大鼠破骨細胞經TRAP染色檢測，純度可達30%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產品：
大鼠趨化因子(FK)elisa檢測試劑盒免費代測
大鼠β內啡肽受體(β-EPR)elisa檢測試劑盒
小鼠親環素B(CYPB)elisa檢測試劑盒
人DNA損傷誘導轉錄因子4樣蛋白(DDIT4/RTP801)elisa分析檢測試劑盒
組織AURORA-C激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
大鼠孕酮受體(PROGR)elisa檢測試劑盒免費代測
INSULIN R-ALPHA 蛋白共沉淀分析試劑盒
小鼠α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)elisa檢測試劑盒
β-半乳糖苷酶（β-GAL）測試盒
熱休克蛋白70蛋白4樣蛋白抗體 HSPA4L
溶血磷脂酶樣蛋白1抗體 LYPLAL1
IV型膠原α3結合蛋白抗體 COL4A3BP
KIAA1688蛋白抗體 KIAA1688
真核翻譯起始因子3K抗體 eIF3K
植烷酸氧化酶抗體 PHYHIP
鈣腔蛋白抗體 CALU
肝細胞源性纖維蛋白原相關蛋白1/FGL1抗體 HFREP1
細胞色素P450 4V2抗體 CYP4V2
細胞周期調控因子10抗體 CDC10
ZDHHC23蛋白抗體 ZDHHC23
β-葡萄糖腦苷脂酶抗體 GBA
ASCL2蛋白抗體 ASCL2
BEND3蛋白抗體 BEND3
跨膜蛋白Sema3C抗體 Sema3C
磷酸化HER4抗體 Phospho-HER4 (Tyr1284)
細胞熒光顯微鏡完全間接檢測試劑盒（含一抗和熒光二抗）
大鼠破骨細胞siRNA轉染試劑 500μl
微型RNA（miRNA）定量擴增分析試劑盒
ALAD; ALADH; ALADR; Aminolevulinate dehydratase; Aminolevulinate, delta, dehydratase; Delta aminolevulinic acid dehydratase; Delta-aminolevulinic acid dehydratase; HEM2_HUMAN; Lv; PBGS; Porphobilinogen synthase.
大鼠臍帶間充質干細胞
小鼠主動脈瓣膜間質細胞
CW-2人結腸癌細胞
AR42J大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養基（含有1X雙抗）洗滌一次。經過的心臟破碎組織塊經過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養皿正置3-5小時，然后更換培養皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養皿在4℃正置過夜）；
（7）培養基培養：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養基，然后在恒溫潮濕細胞培養箱（37℃，5% CO2）培養48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據細胞數量種植到對應的培養皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。