實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
小鼠視網膜前體細胞分離自視網膜組織；視網膜居于眼球壁的內層，是一層透明的薄膜。視網膜由色素上皮層和視網膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網膜脫離。色素上皮層與脈絡膜緊密相連，由色素上皮細胞組成，它們具有支持和營養光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復等作用。組織學上視網膜分為10層，由外向內分別為：色素上皮層、視錐、視桿細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內顆粒層、內叢狀層、神經節細胞層、神經纖維層、內界膜。視網膜內層為襯于血管膜內面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側有一視神經。視網膜上的感覺層是由三個神經元組成。神經元是視細胞層，專司感光，它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網膜上，而視錐細胞則在中心凹處多。層叫雙節細胞，約有10到數百個視細胞通過雙節細胞與一個神經節細胞相聯系，負責聯絡作用。第三層叫節細胞層，專管傳導。視網膜是一層菲薄的但又非常復雜的結構，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網膜感受器沖動的神經纖維跨越視網膜表面，經由視神經到達出口。視網膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區，其分辨能力強。
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組織來源 |
產品規格 |
貨號 |
用途 |
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視網膜組織 |
5×105cells/T25細胞培養瓶 |
A01X1998 |
僅供科研研究實驗 |
培養信息：
培養基 含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 半貼半懸浮
細胞形態 圓形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠視網膜前體細胞采用胰蛋白酶消化法結合培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的小鼠視網膜前體細胞經Nestin熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產品：
倉鼠促卵泡素(FSH)elisa檢測試劑盒
酒類激酶法定量檢測試劑盒
豚鼠干擾素α(IFNα)elisa檢測試劑盒
大鼠三碘甲狀腺原氨酸(T3)elisa檢測試劑盒
細胞內氧化應激活性氧（ROS）比色法測定試劑盒（單線態氧氣）
動物腎臟組織細胞分離培養試劑盒
大鼠腎上腺素能受體β1(ADRβ1)elisa檢測試劑盒
線蟲β-半乳糖苷酶比色法定量檢測試劑盒
豚鼠心鈉肽(ANP)elisa檢測試劑盒
絲裂原活化蛋白激酶MAP4K4重組兔單克隆抗體 MAP4K4
肽基脯氨酰順反異構酶FKBP10抗體 FKBP10
PE標記小鼠CD30單克隆抗體 mouse CD30/PE
Rabbit Anti-Acetyl-Histone H3 (Lys4) antibody
1號染色體開放閱讀框177抗體 C1orf177
2-二醇脫氫酶抗體 DHDH
肌動蛋白結合蛋白6抗體 CORO6
雞毒支原體抗體 MG
嗅覺受體家族2亞基4抗體 OR2A4
血小板源性生長因子受體B/PDGFRβ抗體 PDGF Receptor beta
蛋白磷酸酶受體PTPRB抗體 PTPRB
癲癇樣相關蛋白6抗體 SEZ6L
F-box蛋白38抗體 FBXO38
FITC標記人CD63單克隆抗體 human CD63/FITC
磷酸化組蛋白去乙酰化酶5抗體 Phospho-HDAC5 (Ser259)
球蛋白A誘導源蛋白抗體 IGIP
魚白介素8(IL-8/CXCL8)elisa檢測試劑盒
小鼠視網膜前體細胞大鼠紅細胞**素受體(EPOR)elisa檢測試劑盒
細胞GSK3α激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
Docking protein 5; Docking protein 5 like; Docking protein 6; DOK 6; DOK6; DOK-6; DOK5; DOK 5; DOK-5; DOK5L; Downstream of tyrosine kinase 6; HsT3226; MGC20785; Protein dok 5; DOK6_HUMAN.
小鼠視網膜神經節細胞
兔腦血管周細胞
HBZY-1(大鼠腎小球系膜細胞)
KATO III 人胃腺癌細胞(低分化
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養基（含有1X雙抗）洗滌一次。經過的心臟破碎組織塊經過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養皿正置3-5小時，然后更換培養皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養皿在4℃正置過夜）；
（7）培養基培養：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養基，然后在恒溫潮濕細胞培養箱（37℃，5% CO2）培養48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據細胞數量種植到對應的培養皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。