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WB抗體試驗說明
日期：2025-06-21 08:14
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摘要：
WB抗體檢測某一個基因的表達產物或者要比較表達產物量的相對變化，先選方法是western blot。而Western Blot試驗中比較這些的前提條件是等量的細胞上樣，這樣才有比較的基礎。而人為的操作會產生一定的誤差，這些誤差可以通過測定每個樣品中實際轉到膜上的內參來校正。因此選擇一個合適的內參抗體來校正上樣誤差是非常重要的。所以嚴謹的Western Blot實驗設計中需要有良好的參照體系，后續的實驗結果分析才具有說服性。
在Western Bloting實驗中，可能內參即是內部參照(Internal Control)，對于哺乳動物細胞表達來說一般是指由管家基因編碼表達的蛋白(Housekeeping Proteins)，它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物。
在Western Blotting 中使用內參其實就是在WB過程中的另外用內參對應的抗體檢測內參，這樣在檢測目的產物的同時可以檢測內參的表達，由于內參在各組織和細胞中的表達相對恒定，借助檢測每個樣品內參的量就可以用于校正上樣誤差，這樣半定量的結果才更為可信。此外使用內參可以作為空白對照，檢測蛋白轉膜情況是否完全、整個Western Blot顯色或者發光體系是否正常。
常用的細胞總蛋白質內參有GAPDH、beta-actin和beta-tubulin等。對于一些植物的樣本，則需要特別的植物Actin蛋白作為內參，同樣的，如果提取的樣本是細胞核蛋白，那么PCNA或者組蛋白H3都是被經常使用的，而針對一些研究線粒體的客戶，那么Cox IV則被較多的文獻引用作為線粒體總蛋白的內部參考。