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PCR反應中內參基因的功能
日期：2025-06-21 01:09
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摘要：
PCR反應中內參基因的功能：
1. 判斷樣品提取是否成功。假如你提取了總RNA然后再做逆轉錄得到cDNA，然后再去跑PCR發現沒有結果，是不是表示樣品中沒有你的目的基因呢？答案是：不一定。要根據使用同一模板跑出的內參基因的結果才可判斷。內參基因的CT在一個合理范圍（比如20左右）的前提下，才能說明樣品制備沒問題，在這個前提下，做出來的結果才是可信的。
2 .用來計算目的基因的表達量。在進行相對定量PCR時，所有的目的基因都要經內參基因的校正后才能進行比較，因為每個樣品的提取效率都可能不同，所以不能簡單的...
PCR反應中內參基因的功能：
1. 判斷樣品提取是否成功。假如你提取了總RNA然后再做逆轉錄得到cDNA，然后再去跑PCR發現沒有結果，是不是表示樣品中沒有你的目的基因呢？答案是：不一定。要根據使用同一模板跑出的內參基因的結果才可判斷。內參基因的CT在一個合理范圍（比如20左右）的前提下，才能說明樣品制備沒問題，在這個前提下，做出來的結果才是可信的。
2 .用來計算目的基因的表達量。在進行相對定量PCR時，所有的目的基因都要經內參基因的校正后才能進行比較，因為每個樣品的提取效率都可能不同，所以不能簡單的把每個PCR結果的CT值直接進行比較，這樣是沒有意義的。只有把目的基因的表達量與內參基因的表達量相除以后得到一個比值、然后把這個比值進行比較，才是有意義的，而且這個比值可以量化，終得到表達量的RQ值。
3. 與熔解曲線相對照。有時我們會發現染料法qPCR的熔解曲線很差，并非單峰，這時先不要確定是引物的問題，還要先看一下內參的CT。假如內參的CT值很高，超過30，而目的基因的CT值很大甚至接近40，則說明模板濃度過低，導致出現非特異性擴增的可能性增加、而目的片段含量過少。解決方法是要重新制備PCR模板。