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逆轉錄實驗步驟
日期：2025-06-20 12:57
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摘要：
逆轉錄（reverse transcription），是以RNA為模板合成DNA的過程，合成的DNA稱為cDNA。逆轉錄過程遺傳信息的流動方向為RNA到DNA，與轉錄過程DNA到RNA的方向相反，故稱為逆轉錄。
實驗步驟：
1、試劑化凍后，用手輕彈混勻后短暫離心。
2、 基因組DNA（gDNA）去除：根據RNA樣品的濃度按10pg~1μg計算用量，在RNase-free離心管中依次加入RNase-free ddH2O，5×gDNA Wiper Mix 2μL，RNA樣品，總體系為10μL。用移...
逆轉錄（reverse transcription），是以RNA為模板合成DNA的過程，合成的DNA稱為cDNA。逆轉錄過程遺傳信息的流動方向為RNA到DNA，與轉錄過程DNA到RNA的方向相反，故稱為逆轉錄。
實驗步驟：
1、試劑化凍后，用手輕彈混勻后短暫離心。
2、 基因組DNA（gDNA）去除：根據RNA樣品的濃度按10pg~1μg計算用量，在RNase-free離心管中依次加入RNase-free ddH2O，5×gDNA Wiper Mix 2μL，RNA樣品，總體系為10μL。用移液器吹打混勻后短暫離心。放入PCR儀，設置反應條件為42℃ 2min。
3、第1鏈cDNA合成：根據上一步反應管的數量按以下體系在RNase-free離心管中配制預混液：RNase-free ddH2O 5μL，逆轉錄引物（2μM）1μL，10×RT Mix 2μL，HiScript II Enzyme Mix 2μL，用移液器吹打混勻后短暫離心。在上一步得到的反應管中每管加入10μL，用移液器吹打混勻后短暫離心。放入PCR儀，設置反應條件為25℃ 5min，50℃ 15min，85℃ 5min。所得cDNA產物可立即用于qPCR反應或-20℃保存。