操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內完全解凍，使細胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

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細胞培養操作規程：

主要功能：

（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發血管病變的重要因素。

（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應。

（3）與血管的進展和穩定有關。

 生理變化：

（1）主動脈硬化。

（2）主動脈瘤

（3）主動脈鈣化。

基本特性：

（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。

（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。

（3）原代細胞培養末期液氮凍存。

（4）每凍存管細胞數：>5×105 cells/1ml。

（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。

（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。

培養步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

pCTAP-C　Lison-Dagnelia 蘇丹法脂類物質染色試劑盒

豚鼠單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA Kit　大鼠可溶CD86(B7-2/sCD86)ELISA Kit

非酶多糖劑（DNA專用）　DP medium

pMCSG7 (linearized)　pBGS9

Wade的FiteⅠ抗酸法的改良抗酸桿染色試劑盒　人細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA Kit

大鼠維生素A(VA)ELISA Kit　LTEP-s [LTEPs]細胞株

Hippea medium　pMCSG63

pCAMBIA1381Xb　Altmann固定液

人胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA Kit　轉基因植物NOS基因PCR檢測試劑盒

柱式尿液DNAout　Alkaline vogesella medium

pMyr(60908-5140)　MIGS4.2 (FF575)

Weigert法蘇木精染色試劑盒　人水通道蛋白5(AQP-5)ELISA Kit

大鼠補體片斷5a(C5a)ELISA Kit　U937細胞株

兔睪丸支持細胞硝酸油溶液 英文名稱：Nitroglycerin solution 規格：：1.0ml 保存：：-20℃，避光

己內酰胺 英文名稱：Caprolactam 規格：：50mg 保存：：-20℃，避光

環磷酰胺 英文名稱：Cyclophosphamide 規格：：100mg 保存：：-20℃，避光

環 英文名稱：Cyclohexylamine 規格：：100mg 保存：：-20℃，避光

環吡酮胺 英文名稱：Ciclopirox olamine 規格：：50mg 保存：：-20℃，避光

果糖 英文名稱：Fructose 規格：：100mg 保存：：-20℃，避光

富馬酸酮替芬 英文名稱：Ketotifen fumarate 規格：：50mg 保存：：-20℃，避光

富馬酸氯馬斯汀 英文名稱：Fumaric acid chloride Mastin 規格：：50mg 保存：：-20℃，避光

醋酸甲萘 英文名稱：Menadiol diacetate 規格：：50mg 保存：：-20℃，避光

醋酸去氧皮質酮 英文名稱：Desoxycorticosterone acetate 規格：：30mg 保存：：-20℃，避光

半乳糖 英文名稱：Galactose 規格：：300mg 保存：：-20℃，避光