細胞培養操作：

1) 復蘇細胞：以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中培養，補加培養基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養液后吹勻。
d、將細胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中。 
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。
b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產品名稱	B16-F10小鼠黑色素瘤細胞	英文名稱	B16-F10:B16F10
產品貨號	A01X1032	培養條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%,
生長特性	貼壁細胞	細胞形態	梭形細胞樣；上皮樣細胞樣
產品種屬	小鼠	凍存條件	凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	器官：皮膚；品系：C57BL/6J；：黑色素瘤	用途	僅供科研研究實驗

商品詳情：

生長特性 貼壁細胞

細胞形態 梭形細胞樣；上皮樣細胞樣

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養方案A（默認）

生長培養基:

RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

培養條件:

氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2-3次/周

注意事項 B16系列細胞，使用DMEM培養時可能出現黑色素快速積累，細胞不增殖或死亡的情況，該細胞正常擴增凍存請使用RPMI-1640完培，若您需要進行分泌黑色素等后續相關實驗，可以在擴增凍存細胞后更換為DMEM培養來滿足實驗設計。

參考資料(來源文獻)

背景描述 B16-F10細胞是B16-F0細胞的亞系。

年齡（性別） 不詳

組織來源 器官：皮膚；品系：C57BL/6J；：黑色素瘤

細胞類型 腫瘤細胞

腫瘤類型 黑色素瘤細胞

生物等級 BSL-1

保藏機構 ATCC; CRL-6475

磷酸化Ephrin B2抗體    phospho-Ephrin B2 (Tyr311/316)

熱休克因子蛋白5抗體    HSF5

血小板反應蛋白抗體  Anti-TSP-1/THBS1/Thrombospondin 1    G蛋白偶聯嘌呤受體p2y12抗體  Anti-P2Y12

蛋白酶調解因子8抗體  Anti-PSMD8    SMAD家族9抗體  Anti-SMAD9

羅丹明標記的兔抗人IgA    Rabbit Anti-Human IgA / RBITC

磷酸化接頭蛋白Gab 2抗體   phospho-GAB2 (Tyr452)

鋅指蛋白474抗體  Anti-ZNF474/ZFP106    神經元素2抗體  Anti-Neurogenin 2/NGN2

磷酸化原癌基因c-Met相關酪氨酸激酶抗體  Anti-phospho-Ron/MST1R(Ser1349)    腫瘤抑制蛋白18抗體  Anti-ST18/Znf387

大鼠17-酮類固醇(17-KS)elisa分析檢測試劑盒    17-KS ELISA Kit

人復制蛋白A(RPA-70)elisa分析檢測試劑盒    HumanRPA-70ELISAKit

人肺炎支原體抗體(MP-Ab)elisa分析檢測試劑盒    細胞結合（酯化）酶連續循環比色法定量檢測試劑盒

小鼠腺苷酸環化酶10(ADCY10)elisa檢測試劑盒    大鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)elisa檢測試劑盒免費代測

惡性纖維組織細胞瘤抗體    MFHA1/Malignant fibrous histiocytoma

B16-F10小鼠黑色素瘤細胞脫氫肽酶1抗體    DPEP1

BCL2樣10促凋亡蛋白抗體 BCL2L10    CD20抗體 CD20

酪氨酸磷酸酶受體相互作用蛋白Liprin α2抗體 Liprin alpha 2    磷酸二酯酶8B抗體 PDE8B

細胞傳代培養操作步驟：
（1）當顯微鏡下細胞形態和生長密度達到90%時，進行傳代。
（2）吸棄培養液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養瓶放入37℃培養箱進行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細胞有無超過80%的量，發生收縮變圓、細胞間隙變大。輕輕拍打培養瓶使剩余細胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細胞懸液吸至離心管內，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養液重懸細胞，吹打細胞使其均勻分散。
（7）吸棄細胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養瓶中，補充培養液并搖勻，放置37℃的CO2培養箱進行培養。
（8）根據細胞生長狀態確定換液或傳代時間。
（9）細胞凍存。