
培養方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內,影響培養)后迅速置于的培養皿中,帶入超凈工作臺內進行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區所附的血管結締組織盡可能去除,然后將肝組織反復剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養瓶底壁上; 每個25ml的培養瓶中可接種20塊左右。

⑤培養:將培養瓶慢慢翻轉,使瓶底向上,加入1~2 ml培養液,擰緊瓶蓋,做好標記,置 37 ℃恒溫箱中培養1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉培養瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調整在略微松弛狀態,繼續置37 ℃恒溫箱靜放培養。
⑥觀察:細胞接種后一般幾個小時內即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細胞生長良好,可見培養液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養液。10~15天后可長成致密單層細胞,這時可進行傳代培養。
產品名稱
大鼠肺成纖維細胞
產品規格
5×105cells/T25細胞培養瓶
組織來源
肺組織
生長特性
貼壁
細胞形態
成纖維細胞樣
分類
大鼠原代細胞
貨號
A01X1524
用途
僅供科研實驗
培養信息:
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以內狀態佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞簡介:
大鼠肺成纖維細胞分離自肺組織;肺是機體的呼吸器官,位于胸腔,左右各一,覆蓋于心之上。肺有分葉,左二右三,共五葉。肺經肺系(指氣管、支氣管等)與喉、鼻相連,故稱喉為肺之門戶,鼻為肺之外竅。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞分化而來;成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,其細胞核呈規則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質嗜弱堿性,具明顯的蛋白質合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現跟纖維細胞的互相轉化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養基中。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現為小的突起;6h后細胞基本貼壁完全,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態,細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細胞質透明,細胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細胞融合,并彼此連接成網狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括:構造和維持肺器官的正常形態,合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。
方法簡介:
公司實驗室分離的大鼠肺成纖維細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的大鼠肺成纖維細胞經Vimentin熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產品:
魚類受精卵細胞凍存試劑盒(低溫)
小鼠血小板衍生生長因子CC(PDGF-CC)elisa檢測試劑盒
大鼠結締組織生長因子(CTGF)elisa分析檢測試劑盒
組織磷酸二酯酶5(PDE5)活性酶連續循環定磷比色法定量檢測試劑盒
人生長分化因子-15(GDF-15)elisa檢測試劑盒
犬17羥孕酮(17-OHP)elisa檢測試劑盒免費代測
/酵母胱硫醚-γ-合成酶(cystathionine γ-synthase;CGS)活性熒光定量檢測試劑盒
小鼠抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)elisa分析檢測試劑盒
大鼠頂體蛋白(ACR)elisa檢測試劑盒
細胞色素C氧化酶7A2樣蛋白抗體 COX7A2L
細胞粘合素(固生蛋白)抗體 Tenascin C
X-連鎖凋亡蛋白/性連鎖凋亡抑制蛋白單克隆抗體 XIAP
β-半乳糖苷 alpha2-3 唾液酸轉移酶抗體 ST3GAL4
APC標記人CD8單克隆抗體 human CD8-APC
A型禽流感病毒H1N1蛋白抗體 H1N1 Matrix Protein 1
跨膜γ羧基酸蛋白2抗體 PRRG2
蛋白激酶3抗體 FER
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-12抗體 ADAMTS12
中心體肌動蛋白γ1/增強型PI3K蛋白抗體 Centaurin gamma 1
甘氨酸受體α3/GlyR α3抗體 Glycine Receptor alpha 3
干擾素誘導35蛋白抗體 IFI35
KDELR3蛋白抗體 KDELR3
LASP1蛋白抗體 LASP1
驅動蛋白家族成員3B抗體 KIF3B
溶質載體家族22成員10抗體 SLC22A10
人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)elisa檢測試劑盒
大鼠肺成纖維細胞血清脊髓過氧化酶(MPO)活性高質敏感(DTNB)比色法定量檢測試劑盒
小鼠膠質細胞系來源神經營養因子(GDNF)elisa檢測試劑盒
C9 deficiency; C9a; C9 deficiency with dermatomyositis; CO9_HUMAN; Complement component 9; Complement component 9 deficiency; Complement component C9a; Complement component C9a; C9.
大鼠肺動脈內皮細胞
豬胰腺腺泡上皮細胞
95-D人高轉移肺癌細胞
4T1+luc小鼠乳腺癌細胞熒光素酶標記
原代細胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養箱。每15min搖晃一次,消化時間根據腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細胞濾網過濾細胞,收集;
6. 用培養基重懸,置于培養箱培養。