產品名稱
大鼠卵巢顆粒細胞
產品規格
5×105cells/T25細胞培養瓶
組織來源
卵巢組織
生長特性
貼壁
細胞形態
上皮細胞樣
分類
大鼠原代細胞
貨號
A01X1624
用途
僅供科研實驗
培養信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 上皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介：
大鼠卵巢顆粒細胞分離自卵巢組織；卵巢是雌性動物的生殖器官，卵巢的功能是產生卵以及類固醇**。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側發育（右側已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發育時期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產卵期有關。大多數脊椎動物有兩個卵巢，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結構，而所有鳥類只有左側卵巢有機能。卵巢是位于兩側的一對卵圓形的生殖器官，它的外表有一層上皮組織，其下方有薄層的結締組織。卵巢的內部結構可分為皮質和髓質。皮質位于卵巢的周圍部分，主要由卵泡和結締組織構成；髓質位于中央，由疏松結締組織構成，其中有許多血管、管和神經。卵巢顆粒細胞是卵巢的主要功能細胞，其增殖與分化直接影響著卵泡的生長啟動、發育、排卵、黃體形成以及甾體**分泌等卵巢功能活動。卵巢顆粒細胞是卵泡內的大細胞群，也是主要的功能細胞，卵泡發育的顯著標志之一就是顆粒細胞迅速生長及增殖，而成年動物的卵泡閉鎖主要是由顆粒細胞凋亡引起，尤其在卵泡發育后期，此外，顆粒細胞還與卵泡膜細胞共同完成卵巢**的合成，維持著有利于卵母細胞生長和成熟的微環境。細胞形狀呈圓形或橢圓形。
方法簡介：
公司實驗室分離的大鼠卵巢顆粒細胞采用先機械分離，而后膠原酶消化，后差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的大鼠卵巢顆粒細胞經FSHR熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
①動物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內，影響培養）后迅速置于的培養皿中，帶入超凈工作臺內進行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區所附的血管結締組織盡可能去除，然后將肝組織反復剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養瓶底壁上; 每個25ml的培養瓶中可接種20塊左右。
⑤培養：將培養瓶慢慢翻轉，使瓶底向上，加入1~2 ml培養液，擰緊瓶蓋，做好標記，置 37 ℃恒溫箱中培養1~2小時，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉培養瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調整在略微松弛狀態，繼續置37 ℃恒溫箱靜放培養。
⑥觀察：細胞接種后一般幾個小時內即可貼壁，并開始生長。如果無污染且細胞生長良好，可見培養液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時可補加或更換培養液。10~15天后可長成致密單層細胞，這時可進行傳代培養。
原代細胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養箱。每15min搖晃一次，消化時間根據腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細胞濾網過濾細胞，收集；
6. 用培養基重懸，置于培養箱培養。
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