
培養方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內,影響培養)后迅速置于的培養皿中,帶入超凈工作臺內進行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區所附的血管結締組織盡可能去除,然后將肝組織反復剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養瓶底壁上; 每個25ml的培養瓶中可接種20塊左右。

⑤培養:將培養瓶慢慢翻轉,使瓶底向上,加入1~2 ml培養液,擰緊瓶蓋,做好標記,置 37 ℃恒溫箱中培養1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉培養瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調整在略微松弛狀態,繼續置37 ℃恒溫箱靜放培養。
⑥觀察:細胞接種后一般幾個小時內即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細胞生長良好,可見培養液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養液。10~15天后可長成致密單層細胞,這時可進行傳代培養。
產品名稱
大鼠氣管平滑肌細胞
產品規格
5×105cells/T25細胞培養瓶
組織來源
氣管
生長特性
貼壁
細胞形態
成纖維細胞樣
分類
大鼠原代細胞
貨號
A01X1521
用途
僅供科研實驗
培養信息:
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以內狀態佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞簡介:
大鼠氣管平滑肌細胞分離自氣管組織;氣管(Trachea),呼吸器官的一部分;為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣,與環狀軟骨相連;向下至第四、五胸椎體(相當胸骨角平面)交界處,分左、右主支氣管,分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個半環狀軟骨構成,有彈性,軟骨為“C”字形的軟骨環,缺口向后,各軟骨環以韌帶連接起來,環后方缺口處由平滑肌和致密結締組織連接,保持了持續張開狀態。管腔襯以粘膜,表面覆蓋纖毛上皮,粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒,纖毛不斷向咽部擺動將粘液與灰塵排出,以凈化吸入的氣體。氣管平滑肌是氣管的重要結構組成之一,在機體的正常生理過程中發揮著重要作用;能夠保持氣道張力,維持氣道管狀形態,從而有利于氣體流通,保持肺部通氣。氣管平滑肌細胞原代分離培養3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態大小不一,呈梭形、不規則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態學特征和生長特點。氣管平滑肌細胞的異常是呼吸道的重要病理特征之一,其增生、肥大是氣道重塑的關鍵。
方法簡介:
公司實驗室分離的大鼠氣管平滑肌細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯合消化法結合組織貼塊法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的大鼠氣管平滑肌細胞經α-SMA熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產品:
sRANKLELISAKit
大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白(E-Cad)elisa分析檢測試劑盒
E-Cad ELISA Kit
人谷氨酸谷草轉氨酶2,線粒體(谷草轉氨酶2)(GOT2)elisa分析檢測試劑盒
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大鼠羧化不全骨鈣素(ucOC)elisa檢測試劑盒
LEUCOCYTE ELASTASE
活性檢測試劑盒-AlamarBlue1000T
LOWRY蛋白質濃度定量試劑盒
乙酰化組蛋白H2B K15抗體
Histone H2B (acetyl K15)
5-羥色胺受體6抗體
5HT6 Receptor
大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體β(PPAR-B/PPARD)elisa檢測試劑盒
絲狀蛋白提取試劑盒(2D電泳用)100T
人鈣結合蛋白S100A14 elisa檢測試劑盒
小量腺病毒沉淀法純化試劑盒
p400蛋白抗體
p400
鈣加壓素2抗體
Calcipressin 2
轉甲狀腺素蛋白抗體 Anti-Transthyretin/Prealbumin
前纖維蛋白2抗體 Anti-Profilin 2
蛋白磷酸酶2Cα抗體 Anti-PP1A/PP2CA/PPP1CA
肺表面活性蛋白C抗體 Anti-SP-C
堿性磷酸酶(AP)標記的小鼠抗兔IgG H&L
大鼠氣管平滑肌細胞Mouse Anti-Rabbit IgG H&L / AP
新朊蛋白抗體(C端)
2410091M23Rik; Developmental pluripotency associated 4; Developmental pluripotency associated protein 4; Developmental pluripotency-associated protein 4; Dppa 4; DPPA4; DPPA4_HUMAN; FLJ10713.
大鼠氣管上皮細胞
小鼠脂肪細胞
D341 Med人腦髓母細胞瘤細胞
AsPC-1 人轉移胰腺腺癌細胞
原代細胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養箱。每15min搖晃一次,消化時間根據腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細胞濾網過濾細胞,收集;
6. 用培養基重懸,置于培養箱培養。