實驗方法:

一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養后，細胞容易貼壁生長。

細胞簡介：

大鼠腎動脈內皮細胞分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是**尿液，借以體內代謝產物及某些廢物、毒物，同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質，如葡萄糖、蛋白質、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調節水、電解質平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有功能，**腎素、促紅細胞**素、活性維生素D3、前列腺素、激肽等，又為機體部分的降解場所和腎外的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內環境的穩定，使新陳代謝得以正常進行。腎動脈的分支為葉間動脈，穿行于腎柱內，上行至皮質與髓質交界處，形成與腎表面平行的弓狀動脈。小葉間動脈向被膜發出，并向周圍的腎小體發出入球小動脈，進入腎小囊后形成球形的網，再匯集成出球小動脈，出腎小體。直小動脈分支形成網，再匯合成直小靜脈，入弓狀靜脈、葉間靜脈，后匯合成腎靜脈經腎門出腎，注入下腔靜脈。腎動脈既是腎的營養血管，又是腎的機能血管，與腎泌尿機能密切相關。腎動脈在腎實質內形成兩個網：腎小球網，血壓較高，利于血漿濾過形成原尿；球后網，血壓較低，利于腎小管的重吸收。腎動脈內皮細胞是腎動脈的重要結構細胞之一，在機體的正常生理過程中發揮著重要作用。腎動脈內皮細胞主要功能有：①在血漿濾過形成原尿的過程中起重要作用，②在腎小管的重吸收過程中起重要作用，③保持凝血和纖溶的動態平衡。

培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%胰蛋白酶

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠腎動脈內皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法、并通過內皮細胞培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠腎動脈內皮細胞經CD31熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。

公司正在出售的產品：

實驗具體步驟：

（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；

（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯合消化組織3-5 min，

利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）

鑷子將組織塊種植于培養皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養皿正置3-5小時，然后更換培養皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養皿在4℃正置過夜）；

（7）培養基培養：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養基，然后在恒溫潮濕細胞培養箱（37℃，5% CO2）培養48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；

根據細胞數量種植到對應的培養皿/瓶中；