細胞簡介：

大鼠輸尿管上皮細胞分離自輸尿管組織；輸尿管上接腎盂，下連膀胱，是一對細長的管道，呈扁圓柱狀，位于腹膜后，為一肌肉粘膜所組成管狀結構，沿腰大肌內側的前方垂直下降進入骨盆。輸尿管有三個狹窄部：一個在腎盂與輸尿管移行處（輸尿管起始處）；一個在越過小骨盆入口處；后一個在進入膀胱壁的內部。這些狹窄是結石、及壞死組織容易停留的部位。輸尿管——膀胱連接處有一種特殊結構，即瓦耳代爾鞘，它能有效地防止膀胱內尿液返流到輸尿管。臨床上將輸尿管分為上、中、下三段，也可稱為腹段、盆段、膀胱段。其中，腹段自腎盂輸尿管交界處，到跨越髂動脈處；盆段，自髂動脈到膀胱壁；膀胱段，自膀胱壁內斜行至膀胱粘膜、輸尿管開口。輸尿管管壁分為4層，黏膜層、固有層、肌層、外膜。黏膜層表面為移行上皮，約有4-5層細胞；固有層由細密的結締組織構成，內含膠原纖維和少量彈性纖維；輸尿管肌層主要由內縱和外環兩層平滑肌組成；外膜為疏松結締組織，營養血管由外膜進入輸尿管。其中，輸尿管上皮細胞主要分布于黏膜層。

培養信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%胰蛋白酶

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠輸尿管上皮細胞采用先中性蛋白酶消化、然后機械分離法使輸尿管分層、后膠原酶消化，并通過上皮細胞培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠輸尿管上皮細胞經PCK熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。

實驗具體步驟：

（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯合消化組織3-5 min，

利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）

鑷子將組織塊種植于培養皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養皿正置3-5小時，然后更換培養皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養皿在4℃正置過夜）；

（7）培養基培養：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養基，然后在恒溫潮濕細胞培養箱（37℃，5% CO2）培養48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；

根據細胞數量種植到對應的培養皿/瓶中；

實驗方法:

一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養后，細胞容易貼壁生長。

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