
培養方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內,影響培養)后迅速置于的培養皿中,帶入超凈工作臺內進行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區所附的血管結締組織盡可能去除,然后將肝組織反復剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養瓶底壁上; 每個25ml的培養瓶中可接種20塊左右。

⑤培養:將培養瓶慢慢翻轉,使瓶底向上,加入1~2 ml培養液,擰緊瓶蓋,做好標記,置 37 ℃恒溫箱中培養1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉培養瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調整在略微松弛狀態,繼續置37 ℃恒溫箱靜放培養。
⑥觀察:細胞接種后一般幾個小時內即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細胞生長良好,可見培養液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養液。10~15天后可長成致密單層細胞,這時可進行傳代培養。
產品名稱
人肝竇內皮細胞
產品規格
5×105cells/T25細胞培養瓶
組織來源
肝臟組織
生長特性
貼壁
細胞形態
內皮細胞樣
分類
人原代細胞
貨號
A01X1301
用途
僅供科研實驗
培養信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 內皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞簡介:
人肝竇內皮細胞細胞分離自肝臟組織;肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官,并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用;肝臟也**消化系統中之膽汁。肝臟是機體內臟里大的器官,位于機體中的腹部位置,在右側橫隔膜之下,位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,胃的上方。肝臟是機體消化系統中大的消化腺,為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官,又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態結構:肝臟位于右上腹,隱藏在右側膈下和肋骨深面,大部分肝為肋弓所復蓋,僅在腹上區、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,肝上面則與膈及腹前壁相接。肝竇內皮細胞(SEC)是肝臟內所占比例的非實質細胞,位于肝竇腔與肝細胞之間,具有物質轉運、吞噬、抗原提呈、耐受等功能。SEC由于擁有一般細胞所沒有的窗孔結構、細胞間連結松散、內皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性,從而達到快速交換各種大小分子的目的。肝在遭到多種病原侵襲時,肝竇內皮細胞窗孔逐漸減少或消失,內皮下基膜形成,產生類似于連續型的結構,這一過程稱為肝竇化。它由多種因素引起,其過程極復雜,在多種肝病的發病前期階段均有出現,近年來受到廣泛關注。
方法簡介:
公司實驗室分離的人肝竇內皮細胞采用混合酶灌流消化、反復低速離心、密度梯度離心法,并通過內皮細胞培養基培養篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的人肝竇內皮細胞經CD31、CD14熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產品:
Mouserudimentalbovineserumalbumincheck-upELISAKit
甲型流感H5N1(Avian Flu)HA elisa分析檢測試劑盒
Influenza A H5N1(Avian Flu)HA ELISA Kit
人彈性蛋白酶(Elastase)elisa分析檢測試劑盒
HumanElastaseELISAKit
小鼠V-Jun肉瘤病毒癌基因源物(JUN)elisa檢測試劑盒
TBS緩沖液10× 500ml
細胞TRAIL 蛋白表達熒光定量檢測試劑盒
綿羊5羥二十碳四烯酸(5-HETE)elisa分析檢測試劑盒
鉀離子通道蛋白家族成員4抗體
KCNE4
真核翻譯起始因子2C4抗體
Argonaute 4
大鼠血小板衍生生長因子B(PDGF-B)elisa檢測試劑盒
載玻片細胞TNF ALPHA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒
小鼠opiorphin elisa分析檢測試劑盒
MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒500T
環指蛋白131抗體
RNF131
補體因子H相關蛋白4抗體
CFHL4
磷酸化神經生長相關蛋白SCG10抗體 Anti-phospho-STMN2/SCG10 (Ser50)
血小板白細胞C激酶底物源結構域M2抗體 Anti-PLEKHM2/SKIP
泛酸激酶3抗體 Anti-PANK3
泛素化組蛋白H2AX抗體 Anti-Histone H2A.X (Ubiquityl Lys119)
膠體金標記的兔抗小鼠IgG H&L
人肝竇內皮細胞Rabbit Anti-Mouse IgG H&L / Gold
鋅指蛋白ZIC5抗體
cancer/testis antigen 102; Centrosome-related protein TCC52; CT102; DCA12_HUMAN; DCAF12; DDB1- and CUL4-associated factor 12; TCC52; Testis cancer centrosome-related protein; WD repeat domain 40A; WD repeat-containing protein 40A; WDR40A.
人肝內膽管上皮細胞
小鼠腎小管上皮細胞
JIMT-1人乳腺癌細胞
Calu-3人肺腺癌細胞
原代細胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養箱。每15min搖晃一次,消化時間根據腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細胞濾網過濾細胞,收集;
6. 用培養基重懸,置于培養箱培養。