
產品名稱
小鼠冠狀動脈內皮細胞
產品規格
5×105cells/T25細胞培養瓶
組織來源
冠狀動脈
生長特性
貼壁
細胞形態
內皮細胞樣
分類
小鼠原代細胞
貨號
A01X1779
用途
僅供科研實驗
培養信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 內皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞簡介:
小鼠冠狀動脈內皮細胞分離自冠狀動脈組織;冠狀動脈是供給心臟血液的動脈,起于主動脈根部,分左右兩支,行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則,將冠狀動脈的分布分為三型:右優勢型、均衡型、左優勢型。左右冠狀動脈是升主動脈的對分支。左冠狀動脈為一短干,發自左主動脈竇,經肺動脈起始部和左心耳之間,沿冠狀溝向左前方行后,立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行,旋支繞過心尖切跡至心的膈面與右冠狀動脈的后室間支相吻合。冠狀動脈內皮細胞呈單層扁平分布,是一薄層的專門上皮細胞,它形成冠狀動脈的內壁,是血管管腔內血液及其他血管壁(單層鱗狀上皮)的接口。內皮細胞是沿著整個循環系統,由心臟直至小的微血管。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠冠狀動脈內皮細胞采用混合酶短暫消化后組織貼塊、結合內皮細胞培養基培養篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的小鼠冠狀動脈內皮細胞經CD31熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內,影響培養)后迅速置于的培養皿中,帶入超凈工作臺內進行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區所附的血管結締組織盡可能去除,然后將肝組織反復剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養瓶底壁上; 每個25ml的培養瓶中可接種20塊左右。

⑤培養:將培養瓶慢慢翻轉,使瓶底向上,加入1~2 ml培養液,擰緊瓶蓋,做好標記,置 37 ℃恒溫箱中培養1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉培養瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調整在略微松弛狀態,繼續置37 ℃恒溫箱靜放培養。
⑥觀察:細胞接種后一般幾個小時內即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細胞生長良好,可見培養液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養液。10~15天后可長成致密單層細胞,這時可進行傳代培養。
原代細胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養箱。每15min搖晃一次,消化時間根據腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細胞濾網過濾細胞,收集;
6. 用培養基重懸,置于培養箱培養。

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