實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
肺微血管內皮細胞構成半選擇性屏障，該屏障對于肺氣體交換，調節液體和可溶物在血液與肺間質之間的流動具有重要意義。它還具有代謝功能，可以執行一定的非呼吸功能。在肺損傷中，肺微血管內皮細胞是活性氧類的重要靶細胞之一。在肺炎的發生過程中，神經體液介質和氧化劑作用于內皮細胞，使得細胞間隙滲透性增加，蛋白質由血液進入間質。細胞間隙滲透性的增加導致低氧血癥，出現呼吸窘迫綜合征和非心源性肺水腫。
|
組織來源 |
產品規格 |
貨號 |
用途 |
|
肺組織 |
5×105cells/T25細胞培養瓶 |
A01X1526 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）細胞來源于實驗動物的正常肺組織。
2)細胞鑒定：血管假性血友病因子（vWF）熒光染色為陽性。
3)經鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：上皮樣，多角形細胞，貼壁培養。
推薦培養基
我們推薦使用 Delf 原代周 細胞 培養體系 作為體外培養的培養基。
公司正在出售的產品：
MouseEotaxin2ELISAKit
大鼠補體因子D(adipsin)(CFD)elisa分析檢測試劑盒
CFD ELISA kit
人病毒(PV)抗體(IgG)elisa分析檢測試劑盒
HumanPoliomyelitisVirus(PV)antibodyIgGELISAKit
線粒體功能詹納斯綠B（JGB）染色試劑盒
大鼠胰島衍生蛋白3α(REG3α)elisa檢測試劑盒
通用型艱難梭菌（Clostridium difficile）基因檢測試劑盒
小鼠β內酰胺酶抑制劑(BLI)elisa檢測試劑盒
魚胰島素樣生長因子II(IGF2)elisa分析檢測試劑盒
IGF2 ELISA kit
人垂草扁桃酸(VMA)elisa分析檢測試劑盒
HumanVMAELISAKit
人EB病毒核抗原3A抗體(IgM)elisa檢測試劑盒
細胞CASEIN KINASE 1δ激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
小鼠趨化因子配體1(CCL1)elisa分析檢測試劑盒
大鼠過氧化脂質/乳過氧化物酶(LPO)elisa分析檢測試劑盒
抑癌基因NDRG4抗體
NDRG4
細胞外基質蛋白FREM2抗體
FREM2
轉移生長因子β3（TGFβ3）抗體 Anti-TGF beta 3
p53誘導核蛋白1抗體 Anti-p53 DINP1
轉錄因子OTX1抗體 Anti-OTX1
第10號染色體開放閱讀框27抗體 Anti-C10orf27/SPATIAL
Cy7標記的兔抗猴IgM
大鼠肺微血管周細胞Donkey Anti-Rabbit IgG H&L / PE
鋅指蛋白AN1-D3抗體
Telomerase catalytic subunit; EST2; hEST2; TCS1; Telomerase associated protein 2; Telomere Reverse Transcriptase; TP2; TRT; Telomerase reverse transcriptase; Telomerase Catalytic Subunit; Telomerase-associated protein 2; TERT_HUMAN.
大鼠肺微血管周細胞
兔冠狀動脈內皮細胞
UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維細胞
LNCaP C4-2B人前列腺癌細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養基（含有1X雙抗）洗滌一次。經過的心臟破碎組織塊經過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養皿正置3-5小時，然后更換培養皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養皿在4℃正置過夜）；
（7）培養基培養：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養基，然后在恒溫潮濕細胞培養箱（37℃，5% CO2）培養48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據細胞數量種植到對應的培養皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。