
培養方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內,影響培養)后迅速置于的培養皿中,帶入超凈工作臺內進行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區所附的血管結締組織盡可能去除,然后將肝組織反復剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養瓶底壁上; 每個25ml的培養瓶中可接種20塊左右。

⑤培養:將培養瓶慢慢翻轉,使瓶底向上,加入1~2 ml培養液,擰緊瓶蓋,做好標記,置 37 ℃恒溫箱中培養1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉培養瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調整在略微松弛狀態,繼續置37 ℃恒溫箱靜放培養。
⑥觀察:細胞接種后一般幾個小時內即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細胞生長良好,可見培養液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養液。10~15天后可長成致密單層細胞,這時可進行傳代培養。
產品名稱
小鼠胃黏膜成纖維細胞
產品規格
5×105cells/T25細胞培養瓶
組織來源
胃組織
生長特性
貼壁培養
細胞形態
長梭形細胞
分類
小鼠原代細胞
貨號
A01X1823
用途
僅供科研實驗
細胞特性:
1) 組織來源于實驗動物小鼠的正常胃組織。
2) 細胞鑒定: 纖維連接蛋白( Fibronectin)或波形蛋白(Vimentin)熒光
染色為陽性。
3) 經鑒定細胞純度高于 90 %。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5) 細胞生長方式:長梭形細胞,不規則細胞,貼壁培養。
推薦培養基
我們推薦使用 DELF原代成纖維細胞培養體系 作為該細胞的培養基。
細胞簡介:
胃壁一般由 3 層組織構成,內層是粘膜層,外層是漿膜層 ,中間是由平滑肌組成的肌層 。成纖維細胞是結締組織中常見的細胞,由胚胎時期的間充質細胞分化而來。
成纖維細胞的主要功能之一是合成膠原蛋白及其他細胞外基質,在組織器官纖維化過程中發揮重要作用。
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原代細胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養箱。每15min搖晃一次,消化時間根據腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細胞濾網過濾細胞,收集;
6. 用培養基重懸,置于培養箱培養。